กรูและลูซี่ ให้กับเนิดเด็กน้อยตัวแสบ กรู จูเนียร์ งานนี้สามสาวตัวน้อยแอ็กเนส อีดิธและมาร์โก้ต่างจะได้เป็นพี่สาวอย่างเต็มตัวพร้อมกับช่วยเหลือพ่อแม่ของพวกเขาดูแลเจ้าเด็กแสบ ขณะเดียวกันแม็กซีม เลอ มาลและวาเลนติน่า คู่รักวายร้ายหน้าใหม่ก็กำลังเตรียมการครั้งสำคัญเพื่อจัดการกับครอบครัวมิสเตอร์แสบ ทำให้พวกเขาทั้งหมดต้องหลบหนีไปตั้งหลักเสียก่อน